一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性： 通常所用的PCR方法都在两个方面有局限，即目标产物精确程度和合成片段的大小。Pfu(Pyrococcus furiosus)DNA聚合酶，具有完整的3 外切酶校读活性（3 -editing-exonuclease），可以将每个循环中碱基的错配率由10*-4降到10*-3，从而提高PCR产物的准确性。但它在扩增1.5-2.0kb片段时，效率比Klentaq l(Taq DNA聚酶N-末端缺失突变体，类似于E.coli DNA聚合酶Ｉ Klenow片段）或AmpliTaq（全长的Taq DNA聚合酶）等聚合酶差；在扩增5.0-7.0kb片段时亦不比各种形式的Taq DNA聚合酶（如Ampli Taq、Klentaq 1、Klentaq 5等N-末端缺失的变异株）有明显优越之处。因而以往的PCR反应产物限制在5.0kb以内。超出这一范围，PCR扩增反应效率将明显下降，同时......阅读全文 法医DNA检测技术的现状及展望 法医DNA检测技术的现状及展望庞晓东陈学亮荣海博俞丽娟管桦张涛公安部第一研究所DNA检测技术的应用,为法医学带来了一场技术革命。通过对遗传物质DNA的序列多态性及长度多态性的检验,即可实现个体识别及亲权鉴定,该技术正在成为当前法医物证鉴定最 常用的分子生物学基本技术 核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的 PCR技术 PCR技术的应用 一滴残留在裙子上的精液使得美国总统BillClinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerasechainreaction)--聚合 PCR技术应用进展 PCR技术自1985年建立以来，发展之迅速、应用之广泛，表明其具有强大的生命力.近些年来，基于PCR的基本原理，许多学者充分发挥创造性思维，对PCR技术进行研究和改进，使PCR技术得到了进上步地完善，并在此基础上派生出了许多新的用途.原位PCR技术 原位PCR就是在组织 PCR技术（六）：PCR技术应用进展 PCR技术自1985年建立以来，发展之迅速、应用之广泛，表明其具有强大的生命力.近些年来，基于PCR的基本原理，许多学者充分发挥创造性思维，对PCR技术进行研究和改进，使PCR技术得到了进上步地完善，并在此基础上派生出了许多新的用途.原位PCR技术 原位PCR就是在组织细胞里进行PCR 血液分子生物学检验技术及临床应用 血液分子生物学检验技术主要包括PCR技术、DNA测序技术、限制性片段长度多态性（RFLP）、转基因技术及基因芯片（DNA-chip）技术等分子生物学技术。目前这些技术已应用于血液病基因分析、基因诊断、白血病分型、指导治疗、判断预后和微小残留病检测等方面。 （1）核酸分子杂交技术原理和方法 1）So 血液分子生物学检验技术及临床应用 血液分子生物学检验技术主要包括PCR技术、DNA测序技术、限制性片段长度多态性（RFLP）、转基因技术及基因芯片（DNA-chip）技术等分子生物学技术。目前这些技术已应用于血液病基因分析、基因诊断、白血病分型、指导治疗、判断预后和微小残留病检测等方面。（1）核酸分子杂交技术原理和方法1）South 法医DNA检测仪器及其发展动向分析 摘要：实践证明,法医DNA检测技术和相关仪器在犯罪嫌疑人认定、亲权鉴定和系列串并案侦破中发挥了显著作用,是我国公安一线侦察破案和打击犯罪的重要技术手段。以法医DNA检测技术为主线,对相关仪器的产生背景、发展历程、工作原理、各类技术优劣,以及国内外研究现 定 量 P C R 定量PCR 定义 以参照物为标准对PCR终产物进行分析或对PCR过程的进行监测，来评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR相对定量→绝对定量， 手工操作→自动化检测， 灵敏度与特异性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 特定的待扩增基因片段 起始含量越大，则指 常用的分子生物学基本技术1 DNA重组技术（或基因工程）是20世纪生物学的伟大成就，并已渗透到生命科学包括医学 各个领域，为肿瘤的实验研究和临床诊断及治疗提供了崭新的技术和有用的工具。本附录扼要介绍在分子肿瘤学领域中常用的分子生物学基本技术及其在肿瘤研究中的应用，着重介绍它们的原理和应用。至于具体的技术方法和操作步骤可参阅《分 试管婴儿植入前遗传学诊断单细胞PCR的方法 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）简称PCR技术，是近年来发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术，由于其可使特定DNA片段在数量上呈指数增加至可检测范围，故成为基因诊断的重要方法。在PCR基础上衍生的一些扩增技术已用于基因突变的诊 试管婴儿植入前遗传学诊断单细胞PCR的方法(1) 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)简称PCR技术，是近年来发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术，由于其可使特定DNA片段在数量上呈指数增加至可检测范围，故成为基因诊断的重要方法。在PCR基础上衍生的一些扩增技术已用于基因突变的诊断。目前单基因疾病P 石蜡包埋组织的DNA提取及其应用 近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为，人类基因组并非人们想像的那样稳定，诸如基因重排、扩增、缺失，突变和DNA甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表达和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。 3分钟了解：PCR检测怎么做以及注意事项 PCR反应的准备PCR反应体系10×扩增缓冲液10μl4种dNTP混合物（终浓度）各100～250μmol/L引物（终浓度）各5～20μmol/L模板DNA0.1～2μgTaq DNA聚合酶5～10 UMg2+（终浓度）1～3mmol/L补加双蒸水100 μl其中dNTP、引物、模板DNA、Taq DNA分析技术在法医物证检测中的应用 DNA分析技术在法医物证检测中的应用 摘要：现如今，DNA技术的发展为刑侦工作提供了更多的便利，在针对犯罪人DNA的提取、扩增：以及鉴定分析等方面也都有着非 常重要的作用，因此目前对于DNA分析技术在法医物证检测中的应用研究也有着非常重要的意义。主要介绍了DNA分析技术在法医 物证检测中的具体应用， 分子标记 内容：一、遗传标记二、DNA分子标记三、染色体原位杂交四、DNA分子标记的应用长期以来，植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的，当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时，表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状，如 什么是PCR？ 定义 聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction），聚合酶链式反应具体内容点击：聚合酶链式反应，简称PCR。聚合酶链式反应，其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异 PCR仪的分类及各自的介绍 PCR，中文译为聚合酶链式反应，它是一种DNA的快速扩增技术，其扩增效率之高就象核裂变的“链式反应”一样。PCR技术通过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热的酶的作用，可以在3个小时内把特定的DNA量提高1000万倍。PCR仪也叫基因扩增仪，它是利用PCR技术对特定基因做 PCR仪的分类及各自的介绍 PCR，中文译为聚合酶链式反应，它是一种DNA的快速扩增技术，其扩增效率之高就象核裂变的“链式反应”一样。PCR技术通过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热的酶的作用，可以在3个小时内把特定的DNA量提高1000万倍。PCR仪也叫基因扩增仪，它是利用PCR技术对特定基因做试管内的大量 分子生物学常用实验技术（page 1) 第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分 DNA化学合成的应用 随着DNA合成技术的发展，特别是自动化合成技术的引入，人们能简便、快速、高效地合成其感兴趣的DNA片段。目前，DNA合成技术已成为分子生物学研究必不可少的手段，并且已在基因工程、临床诊断和治疗、法医学等各个领域中日益发挥重要的作用。 1. DNA合成在基因工程和分子生物学研究中的应用 DNA化学合成的应用 随着DNA合成技术的发展，特别是自动化合成技术的引入，人们能简便、快速、高效地合成其感兴趣的DNA片段。目前，DNA合成技术已成为分子生物学研究必不可少的手段，并且已在基因工程、临床诊断和治疗、法医学等各个领域中日益发挥重要的作用。 1. DNA合成在基因工程和分子生物学研究中的应用 PCR技术（十二）：PCR-SSCP的发展现状 随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是PCR技术问 世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称 PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性 片段长度多态性分析(Restric DNA化学合成的应用 随着DNA合成技术的发展，特别是自动化合成技术的引入，人们能简便、快速、高效地合成其感兴趣的DNA片段。目前，DNA合成技术已成为分子生物学研究必不可少的手段，并且已在基因工程、临床诊断和治疗、法医学等各个领域中日益发挥重要的作用。 1. DNA合成在基因工程和分子生物学研究中的应用1.1合成基因目 PCR技术应用十二：结核杆菌诊断 结核杆菌可以导致全身性疾病，特别是在发展中国家，其发病率较高，危害性极大.近几年结核杆菌的变异性较大，对抗痨药物的耐药性增加，从而使结核病的发病大幅度增高.虽然传统的涂片抗酸染色、细菌培养以及胸片检查对大部分结核能作出正确的诊断，但对某些病人亦可造成误诊或漏诊;动物接种虽特异性较高，但因时间较长 食品检验之PCR技术 摘要：近年来，微生物及其产生的各类毒素引发的食品污染层出不穷，微生物污染造成的食源性疾病仍是世界食品安全中令人头痛的问题。随着生物学技术和微电子技术的发展，食品微生物快速检验技术有了较大进展。PCR技术用于食品中致病微生物的检测较之传统方法具有快速、 特异、 敏感等特性 ,其优越性无可比拟 ,因 双重PCR-毛细管电泳法快速检测大豆中转基因成分 【摘要】 目的建立抗草甘膦转基因大豆的快速检测方法。方法：针对转基因大豆基因组中被导入的35S启动子、NOS终止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因，自行设计了两对引物，采用双重PCR同时扩增上述基因，用8g/L羟丙基甲基纤维素为筛分介质，在50cm×100μm i．d．涂壁毛细管中，于一1 基因克隆技术概述 基因克隆技术是分子生物学的核心技术，其目的是获得某一基因或DNA片段的大量拷贝，用于深入分析基因的结构与功能，并可达到人为改造细胞以及物种遗传性状的目的。基因克隆的一项关键技术是DNA重组技术，它利用酶学方法将不同来源的DNA分子进行体外特异性切割，重新拼接组装成一个新的杂合DNA分子。在此基础上将 一种快速有效的基因分型斑马鱼的方法（一） 为了促进斑马鱼的高通量的基因分型，我们开发了一种新的技术——用高通量熔解分析（HRMA）区分野生、杂合、纯合突变。这种耗时一个小时的技术不需要进行限制性内切酶酶切和琼脂糖凝胶电泳的操作。此技术生成的熔解图的敏感性高，可以检测不明确的PCR产物。我们可以对斑马鱼的三种类型的突变进行可靠的基